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细胞ROS如何检测?
在进行刺激物处理前，先测定加载细胞的背景荧光强度。 阴性对照的评估：在绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况。对于流式分析，检查染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是否保持不变。细胞尺寸的变化可能与泡沫化或萎缩有关，这些变化可能是由于处理或有毒反应引起的。
目前，有多种方法用于检测ROS，包括荧光染色法、电子顺磁共振技术（EPR）、化学发光法、色谱法、分光光度法、电化学生物传感器以及基于荧光蛋白等。其中，荧光染色法因其直观、灵敏且操作简便而得到广泛应用。检测原理 荧光染色法中最常用的是DCFH-DA荧光探针法。
该试剂盒利用荧光探针CellROX Green进行ROS检测。CellROX Green本身荧光较弱，但可以自由透过活细胞膜进入细胞内。在细胞内，CellROX Green被ROS氧化后，其氧化产物可掺入染色体DNA中，导致荧光强度增大，产生明亮的绿色荧光。通过荧光显微镜或流式细胞仪等仪器，可以观察并量化细胞内ROS的水平。
硫代巴比妥酸活性物质（TBARS）法测定活性氧（ROS）的实验步骤：实验目的 通过定量细胞产生的丙二醛（MDA）来评估在印迹底物上培养的Vero细胞脂质过氧化和ROS生成的程度，并与在空白玻片上生长的对照组进行比较。
磷酸化修饰-蛋白质的功能“开关”
1、蛋白质翻译后修饰的主要类型 磷酸化 定义与机制：磷酸化是最常见的蛋白质翻译后修饰之一，涉及磷酸基团的添加或去除，这一过程主要通过激酶和磷酸酶的作用来实现。功能与作用：磷酸化在信号传导、细胞周期调控和基因表达等方面发挥着关键作用。通过磷酸化修饰，蛋白质的功能状态可以被迅速且可逆地调节。
2、磷酸化（Phosphorylation）：是最常见的蛋白质转录后修饰之一，主要涉及蛋白质上的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基。此修饰对信号转导过程至关重要，通过添加磷酸基团来改变蛋白质的电荷状态，从而影响其与其他分子的相互作用。
3、磷酸化位点的鉴定是磷酸化修饰组学的核心任务之一。通过质谱技术、抗体特异性检测等方法，可以精确鉴定蛋白质中的磷酸化位点。这些技术不仅能够帮助研究人员确定磷酸化发生的具体位置，还能够分析这些位点在不同生理或病理条件下的变化。
4、蛋白质修饰包括糖类、脂类、核酸、磷酸、硫酸、羧基、甲基、乙酰基、羟基等功能基团以共价键与蛋白质的连接。蛋白质经过修饰，在结合、催化、调节及物理性质等方面都被赋予了新的功能。
5、调节蛋白质定位：修饰可以改变蛋白质在细胞内的定位，使其能够到达正确的功能位置并发挥作用。影响蛋白质间相互作用：通过修饰，可以改变蛋白质与其他分子的相互作用能力，从而调节其在细胞内的功能网络。
6、修饰蛋白组学（protein modification proteomics）是由蛋白组学发展起来的一个新的研究领域，主要关注的是蛋白质在翻译后通过添加或去除化学基团发生的改变。